A ，表皮链球菌RP62A III-A型基因座的示意图 ，显示了本研究中分析的突变体 。CRISPR阵列将重复显示为黑匣子和垫片，上面是彩色的编号框 。B，III-A型CRISPR-CAS免疫反应的模型。CAS10复合物由Cas10和CSM2 – CSM5（在不同的绿色阴影中）组成 ，在处理CAS6的CRISPR阵列转录本后 ，加载了CRRNA指南（未显示）。CRRNA指南用于将CAS10复合物引导到感染后入侵者产生的互补转录本 。目标识别触发了CAS10的两项活动 。棕榈结构域将ATP转化为环状四或六腺苷环的转化，该环用作粘结并激活CSM6（一种非特异性RNase）的第二个信使。该核酸酶降解细胞和侵袭者转录本会导致宿主的生长停滞；对于与CRRNA指南不匹配或在噬菌体裂解循环中弱或后期转录的质粒和噬菌体靶标需要清除质粒和噬菌体靶标的生长停滞 。另外 ，CAS10的HD结构域被激活 ，导致ssDNA的非特异性降解 。据信这种活性集中在入侵者转录气泡或R环内产生的ssDNA上，例如在RNA聚合酶转录伸长过程中形成的ssDNA。最后 ，Cas10复合物的CSM3或CMR4亚基裂解了目标转录物 ，关闭了CAS10的两种酶活性 。在本文中，我们表明 ，III-A型CRISPR-CAS免疫的SSDNase活性也可能导致宿主突变的频率和速率增加 ，这可能是由于宿主染色体的其他ssDNA区域的降解 。C，使用图1B中给出的数据的两侧Mann-Whitney测试对P值进行计算 ，用于野生型S. epidermidis rp62a的突变频率 ， 没有PG0400野生型样品中的两个异常数据点。水平条，中值；N（PG0400野生型）= 14个生物学独立的实验；N（PG0400突变体，无）= 16个生物学独立的实验 。d, Staphylococcus aureus cells (around 109) that were treated with ϕNM1γ6 phage and survived infection through the targeting of an early-expressed gene by the staphylococcal type II-A or type III-A CRISPR–Cas systems were seeded after 2 h of outgrowth on plates with or without rifampicin to calculate their mutation frequency.E ，金黄色葡萄球菌细胞（少于1,000个）用ϕNM1γ6噬菌体处理 ，并通过靶向早期表达的基因（GP12或GP14）通过葡萄球菌II-A型或IIII-A型CRISPR型系统染色或不含rifampicin的浮雕播种而幸免于感染，从而播种了II-A型或III-A型CRISPR – CAS型系统 。f ，使用e中显示的数据计算突变率。G ，金黄色葡萄球菌细胞（少于1,000个）用ϕNM1γ6噬菌体处理，并通过靶向后表达的基因（GP43）通过IIII-A CRISPR-CAS型免疫而幸存于感染 ，并在没有RIFAMPICIN的情况下在平板上播种 ，以计算其突变频率 。在d，e ，g ，盒子限制，四分位间范围；晶须 ，最小到最大；中间线 ，中位数；点，个别数据点；n = 15个生物学独立的实验；P值通过双面Mann-Whitney测试获得 。H，使用G中显示的数据计算突变率。在f ，h中 ，条形图表示均值；误差线代表95％的置信区间。
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希望本篇文章《III-A型CRISPR免疫促进葡萄球菌的诱变》能对你有所帮助！
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